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液相色谱(HPLC)如何选择色谱柱

分类:新闻动态点击:190 发布时间:2024-05-20 10:45:17

HPLC高效液相色谱柱包含与支持材料键合的固定相(通常为多孔硅胶颗粒),以提供较大的表面积。固定相为样本组分的分离提供了基础。

样本的物理化学特性、固定相化学组成、流动相组成、流速和色谱柱温度决定了组分通过色谱柱的速率。研究人员可从各种固定相化学组成和色谱柱尺寸(如长度、内径和支持粒径)中进行选择。 

色谱柱类型

固定相

流动相

应用

反相 (RP)

非极性,如 C18 或苯基

水和极性有机溶剂的混合物

占 HPLC 分离的大多数

正相 (NP)

极性,如未结合硅胶

低极性有机溶剂的混合物

不溶于水的样本和异构体

亲水作用 (HILIC)

极性,如硅胶或酰胺键合相

水和非极性有机溶剂的混合物

反相液相色谱分析对高极性样品的保留较差

离子交换 (IEX)

可离子化基团

通常为盐加缓冲液的水溶液

可离子化样本和大生物分子

离子对

非极性反相色谱柱

非极性条件加离子配对试剂

反相对酸或碱的保留较差

手性

手性基团,如多糖或环糊精

分析物和 SP 依赖物,可以是 RP、NP、极性有机物等

对映体(如外消旋药物混合物)的分离/纯化

疏水相互作用 (HIC)

非极性,短烷基链或苯基

高盐缓冲液梯度,非变性条件

蛋白质,通常为抗体

体积排阻 (SEC)

惰性色谱柱,如右旋糖酐聚合物

与含水或有机流动相配合使用

大生物分子或合成聚合物


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