液相色谱仪开机具体操作看这里！

有机相：(如乙腈、甲醇):使用 HPLC级溶剂，经 0.22um有机滤膜过滤.   

水相：(如缓冲盐、酸/碱溶液)  

用超纯水配制：(电阻率>18.2 MΩ.cm)    

滤前超声脱气 15 分钟，避免产生气泡,再经 0.22 um 水相滤膜过滤

注意事项: 含盐流动相需现配现用，防止微生物滋生或盐析出。标注流动相成分、pH、配制日期。 

替换流动相瓶：关闭泵(防止吸入气泡)取下旧流动相瓶，用新流动相润洗瓶口和管路接口3次,安放新流动相瓶，确保管路浸入液面下(避免吸入气泡)

开机与系统准备

开机顺序:    打开电脑，启动 Agilent OpenLab CDs 软件。    

开启仪器电源:泵→自动进样器→柱温箱→检测器(DAD/VWD)。  

系统初始化/自检:等待各模块状态显示“就绪"    

灌注流动相(Purge)：设置泵为“灌注模式”(打开 Purge 阀，流速5 mL/min).依次灌注 A/B/C/D 四通道，每通道灌注3分钟，排出管路气泡。

关键点:灌注后，流速为0，关闭Purge阀，再恢复流速至正常值(如 1.0 mL/min)    

色谱柱安装:  确认色谱柱流向(箭头方向与流动相流向一致)连接色谱柱，手动拧紧(避免过紧导致漏液或损坏接口)设置流动相比例(如初始条件:95%水相+5%乙腈)流速逐步升高至工作流速(如 0.5→1.0 mL/min，每次增加0.2mL/min，间隔5分钟)    

平衡时间:新柱至少 30分钟(或至基线平稳);换流动相后平衡 15 分钟。

注意事项:含盐流动相替换为高有机相时，!需过渡冲洗(如先用10%甲醇过渡)监测柱压波动(正常波动范围±10%)

压力异常处理:检查是否漏液或流动相未充分脱气管路内是有明显气泡，管路溶剂滤头是否堵塞，流动相是否足够，溶剂滤头再液面以下，安捷伦的过滤小白头是否定期更换，以上处理方法未解决异常需要考虑维护仪器单向阀、更换柱塞杆密封圈。

系统冲洗:若流动相含缓冲盐，实验结束后需以高水相(如 90%水 +10%甲醇)冲洗 30分钟，再过渡至高有机相保存。

空白进样测试: 进样 20μL纯溶剂(如流动相)，运行分析方法，确认无杂峰、基线平稳。

基线异常处理:若出现鬼峰:检查流动相污染或管路残留，重新冲洗系统。

基线漂移:检查柱温稳定性或流动相未充分脱气，流通池污染流动相有长菌或结晶物质。

样品分析与数据采集

样品准备:样品经 0.22 μm 滤膜过滤，装入进样瓶(避免过满，液面距瓶囗≥5 mm)。样品瓶可分为预开口和不预开口样品瓶，可根据样品特性和仪器特性进行选择。

方法设置:创建新方法文件

设置参数泵:流动相比例、流速(如1.0 mL/min)

柱温箱:温度(如 30°C)

检测器:波长(如 280 nm)、采样速率(如 2 Hz)

自动进样器:进样体积(如 20 μL)、洗针次数(如 3次). 

运行序列:在序列表中添加样品信息(名称、位置、方法文件)点击“运行序列”，实时监测色谱图与压力曲线。运行序列前务必要检查样品位置与序列表一致，方法设置是否一致，流动相管路有没有放置错误，压力和基线是否正常，上述检查无异常后开始运行序列。

结束操作与关机

系统冲洗:实验结束后，以高比例有机相(如 90%乙腈)冲洗色谱柱30 分钟，去除残留。

含盐流动相:先用水相冲洗 30 分钟，再过渡到有机相。

色谱柱保存:反相柱:保存在 90%以上甲醇或乙腈中，拆卸后两端密封，正相柱:保存在正已烷中(需根据柱类型调整) 

关机顺序:软件中关闭流速，停止泵。关闭检测器→柱温箱一自动进样器一泵。    退出软件，关闭电脑及仪器电源，

日常维护清单

每日:检查流动相余量(特别是需要过夜运行)、清洁自动进样器外表面，检查废液瓶中废液量及时清理废液。

每周:更换在线过滤器滤芯，冲洗自动进样针。每月:执行泵密封圈润滑，检测检测器灯能量，建议结合仪器说明书与实验室 SOP 灵活调整!