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HPLC高效液相色谱柱包含与支持材料键合的固定相（通常为多孔硅胶颗粒），以提供较大的表面积。固定相为样本组分的分离提供了基础。
样本的物理化学特性、固定相化学组成、流动相组成、流速和色谱柱温度决定了组分通过色谱柱的速率。研究人员可从各种固定相化学组成和色谱柱尺寸（如长度、内径和支持粒径）中进行选择。
色谱柱类型 | 固定相 | 流动相 | 应用 |
反相 (RP) | 非极性，如 C18 或苯基 | 水和极性有机溶剂的混合物 | 占 HPLC 分离的大多数 |
正相 (NP) | 极性，如未结合硅胶 | 低极性有机溶剂的混合物 | 不溶于水的样本和异构体 |
亲水作用 (HILIC) | 极性，如硅胶或酰胺键合相 | 水和非极性有机溶剂的混合物 | 反相液相色谱分析对高极性样品的保留较差 |
离子交换 (IEX) | 可离子化基团 | 通常为盐加缓冲液的水溶液 | 可离子化样本和大生物分子 |
离子对 | 非极性反相色谱柱 | 非极性条件加离子配对试剂 | 反相对酸或碱的保留较差 |
手性 | 手性基团，如多糖或环糊精 | 分析物和 SP 依赖物，可以是 RP、NP、极性有机物等 | 对映体（如外消旋药物混合物）的分离/纯化 |
疏水相互作用 (HIC) | 非极性，短烷基链或苯基 | 高盐缓冲液梯度，非变性条件 | 蛋白质，通常为抗体 |
体积排阻 (SEC) | 惰性色谱柱，如右旋糖酐聚合物 | 与含水或有机流动相配合使用 | 大生物分子或合成聚合物 |
